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苯乙醇胺A檢測試劑盒檢測(尿液組織飼料)
釋出時間↟·•··:2022-09-14 點選量↟·•··:52

EF44A\J2

苯乙醇胺A

快速檢測試劑盒說明書

一◕✘╃₪╃、原理

本試劑盒採用間接競爭ELISA方法▩☁•,在微孔條上預包被偶聯抗原▩☁•,樣本中的殘留物苯乙醇胺A將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗苯乙醇胺A抗體▩☁•,加入酶標記物後▩☁•,用TMB底物顯色▩☁•,樣本吸光值與其所含殘留物苯乙醇胺A的含量成負相關▩☁•,與標準曲線比較即可得出相應殘留物苯乙醇胺A的含量☁↟•。

二◕✘╃₪╃、試劑盒特性

試劑盒靈敏度↟·•··:   0.1ppb

孵育溫度↟·•··:       25℃

孵育時間↟·•··:       30min15min

樣本檢測下限

尿             ·····························  0.1ppb

             ·····························  0.2ppb

             ·····························  0.5ppb

交叉反應率

苯乙醇胺A  ······································ 100%

克倫特羅(Clenbuterol························ <1%

沙丁胺醇(Salbutamol ·····················  <1%

萊克多巴胺(Ractopamine···················  <1%

樣本回收率

尿         ······························  95%±25%

組織◕✘╃₪╃、飼料   ······························  85%±25%

三◕✘╃₪╃、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔▩☁•,一板12

2

標準液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

10ml

藍色帽

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

2X濃縮復溶液

50ml

透明帽

四◕✘╃₪╃、所用儀器◕✘╃₪╃、試劑

具備的儀器↟·•··:酶標儀◕✘╃₪╃、印表機

微量移液器↟·•··:單道 20200µl◕✘╃₪╃、單道1001000µl◕✘╃₪╃、多道 30300 µl

使用的試劑↟·•··:乙酸乙酯◕✘╃₪╃、冰乙酸◕✘╃₪╃、正己烷

五◕✘╃₪╃、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭▩☁•,吸取不同試劑時要更換吸頭☁↟•。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨▩☁•,必要時可對實驗器具進行清潔▩☁•,以避免汙染干擾實驗結果☁↟•。

樣本前處理需配置

配液1   樣本提取液↟·•··:

99ml乙酸乙酯▩☁•,加入1ml冰乙酸▩☁•,混合均勻☁↟•。

配液2   樣本復溶液↟·•··:

2X濃縮復溶液用去離子水1↟·•··:2稀釋☁↟•。

樣本處理↟·•··:

a尿樣本處理方法

20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min▩☁•,直至得到清亮尿樣)▩☁•,暫不使用的樣本應冷凍儲存☁↟•。

樣本稀釋倍數:  1

因樣本存在一定干擾▩☁•,建議以1ppb為樣本陽性 的CUT OFF值☁↟•。  

b組織樣本處理方法

1◕✘╃₪╃、 稱取均質後的組織樣本2±0.05g50ml離心管中

2◕✘╃₪╃、 加入8ml樣本提取液▩☁•,渦旋震盪2min

3◕✘╃₪╃、 室溫4000r/min離心10min

4◕✘╃₪╃、 取上層清液2ml50-60℃吹乾;

5◕✘╃₪╃、 加入1ml正己烷▩☁•,再加入1ml樣本復溶液▩☁•,渦旋震盪30秒;

6◕✘╃₪╃、 室溫4000r/min離心10min;除去上層有機相;

7◕✘╃₪╃、 取下層清液20µl用於分析☁↟•。

樣本稀釋倍數:  2

    因樣本存在一定干擾▩☁•,建議以1ppb為樣本陽性的CUT OFF值☁↟•。

 c飼料樣本處理方法

1◕✘╃₪╃、 稱取均質後的飼料樣本1±0.05g50ml離心管中

2◕✘╃₪╃、 加入10ml樣本提取液▩☁•,渦旋震盪3min

3◕✘╃₪╃、 室溫4000r/min離心10min

4◕✘╃₪╃、 取上層清液2ml50-60℃吹乾;

5◕✘╃₪╃、 加入1ml正己烷▩☁•,再加入1ml樣本復溶液▩☁•,渦旋震盪30秒;

6◕✘╃₪╃、 室溫4000r/min離心10min;除去上層有機相;

7◕✘╃₪╃、 取下層清液20µl用於分析☁↟•。

樣本稀釋倍數:  5

因樣本存在一定干擾▩☁•,建議以2ppb為樣本陽性的CUT OFF值☁↟•。本試劑盒檢測牛尿時回收率偏高☁↟•。   

六◕✘╃₪╃、 酶標免疫分析程式:

測定前應須知↟·•··:

1◕✘╃₪╃、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025℃)☁↟•。

2◕✘╃₪╃、 使用之後立即將所有試劑放回28℃☁↟•。

3◕✘╃₪╃、 ELISA分析中的再現性▩☁•,很大程度上取決於洗板的一致性▩☁•,正確的洗板操作是ELISA測定程式中的要點☁↟•。

4◕✘╃₪╃、 所有恆溫孵育過程▩☁•,避免光線照射▩☁•,用蓋板膜蓋住微孔板☁↟•。

操作步驟↟·•··:

1◕✘╃₪╃、 28℃冷藏環境中取出所需試劑▩☁•,室溫(2025)平衡30min以上▩☁•,注意每種液體試劑使用前均須搖勻☁↟•。

2◕✘╃₪╃、 配液↟·•··:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1↟·•··:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水)▩☁•,或按所需用量配製洗滌液☁↟•。

3◕✘╃₪╃、 取出框架及需要數量的微孔▩☁•,將不用的微孔放入自封袋▩☁•,保存於28℃☁↟•。

4◕✘╃₪╃、 編號↟·•··:將樣本和標準品對應微孔按序編號▩☁•,每個樣本和標準品做2孔平行▩☁•,並記錄標準孔和樣本孔所在的位置☁↟•。

5◕✘╃₪╃、 標準品/樣本20µl/到各自的微孔中▩☁•,然後加酶標記物50µl/▩☁•,再加入80µl/孔的抗體工作液▩☁•,用蓋板膜蓋板▩☁•,輕輕振盪混勻▩☁•,25℃環境反應30min☁↟•。

6◕✘╃₪╃、 將孔內液體甩幹▩☁•,用稀釋好的洗滌液250µl/孔洗板45次▩☁•,每次間隔1530秒▩☁•,用吸水紙拍幹(拍幹後未清除的氣泡可用乾淨的槍頭刺破)☁↟•。

7◕✘╃₪╃、 顯色↟·•··:加入底物A50µl/孔▩☁•,再加入底物B50µl/孔▩☁•,輕輕振盪混勻▩☁•,25℃環境中避光顯色15min☁↟•。

8◕✘╃₪╃、 測定↟·•··:加入終止液50µl/孔▩☁•,輕輕振盪混勻▩☁•,設定酶標儀於450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測▩☁•,5min內讀數)▩☁•,測定每孔OD值☁↟•。

七◕✘╃₪╃、結果判定

結果判定有兩種方法▩☁•,粗略判定可用第1種方法▩☁•,定量判定用第2種方法☁↟•。注意樣本吸光度值與其所含苯乙醇胺A量成負相關☁↟•。

1◕✘╃₪╃、粗略判定↟·•··:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度範圍(ng/ml)☁↟•。假設樣本1的吸光度值為0.3▩☁•,樣本2的吸光度值為1.0▩☁•,標準液吸光度值分別是↟·•··:0ppb2.1430.1ppb1.8660.3ppb1.6150.9ppb0.9642.7ppb0.4138.1ppb0.155☁↟•。則樣本1的濃度範圍是0.3ppb0.9ppb;樣本2的濃度範圍是2.7ppb8.1ppb▩☁•,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中苯乙醇胺A實際濃度☁↟•。

2◕✘╃₪╃、定量分析

1)百分吸光率的計算▩☁•,標準品或樣本的百分吸光率等於標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0標準)的吸光度值▩☁•,再乘以100%▩☁•,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪製與計算

以標準品百分吸光率為縱座標▩☁•,以苯乙醇胺A標準品濃ng/ml)的半對數為橫座標▩☁•,繪製標準曲線圖☁↟•。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中▩☁•,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度▩☁•,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中苯乙醇胺A實際濃度☁↟•。

若利用試劑盒專業分析軟體進行計算▩☁•,更便於大量樣本的準確◕✘╃₪╃、快速分析☁↟•。(歡迎來電索取)

八◕✘╃₪╃、 注意事項

1◕✘╃₪╃、 室溫低於25℃或試劑及標本未回到室溫(2025℃)會導致所有標準的OD值偏低☁↟•。

2◕✘╃₪╃、 在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況▩☁•,則會伴隨著標準曲線不成線性▩☁•,重複性不好的現象☁↟•。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作☁↟•。

3◕✘╃₪╃、 混合要均勻▩☁•,否則會出現重複性不好的現象☁↟•。

4◕✘╃₪╃、 反應終止液為2M硫酸▩☁•,避免接觸皮膚☁↟•。

5◕✘╃₪╃、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度◕✘╃₪╃、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑☁↟•。

6◕✘╃₪╃、 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的髮色劑對光敏感▩☁•,因此要避免直接暴露在光線下☁↟•。

7◕✘╃₪╃、 顯色液若有任何顏色表明變質▩☁•,應當棄之☁↟•。標準品1的吸光度值小於0.5時▩☁•,表示試劑可能變質☁↟•。

8◕✘╃₪╃、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃▩☁•,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化☁↟•。

九◕✘╃₪╃、儲藏條件和保質期

1◕✘╃₪╃、 儲藏條件↟·•··:試劑盒於2-8℃儲存▩☁•,不要冷凍☁↟•。

2◕✘╃₪╃、  期↟·•··:該產品有效期為1年▩☁•,生產日期見包裝盒☁↟•。

提示↟·•··:酶標板真空包裝袋若有漏氣▩☁•,酶標板仍然正常有效▩☁•,不影響實驗結果▩☁•,請放心使用☁↟•。

2011年開始我們致力於在生命科學領域◕✘╃₪╃、生物醫學實驗外包及論文潤色服務▩☁•,協助客戶各類實驗服務及論文潤色▩☁•,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間◕✘╃₪╃、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究▩☁•,歡迎您與我們聯絡☁↟•。

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