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大鼠17β-雌二醇(17β-E2)試劑盒說明書

大鼠17β-雌二醇(17β-E2)試劑盒說明書

產品型號│₪✘:

所屬分類│₪✘:大鼠ELISA

產品時間│₪✘:2022-05-18

簡要描述│₪✘:大鼠17β-雌二醇(17β-E2)試劑盒--打折銷售中₪↟╃•,請▩╃✘╃!

詳細說明│₪✘:

大鼠17β-雌二醇17β-E2試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的│₪✘:本試劑盒用於測定大鼠血清₪↟╃•,血漿,組織及相關液體樣本中17β-雌二醇17β-E2的含量▩✘│☁◕。

實驗原理│₪✘:

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠的17β-雌二醇17β-E2水平▩✘│☁◕。用純化的17β-雌二醇17β-E2抗體包被微孔板₪↟╃•,製成固相抗體₪↟╃•,往包被單抗的微孔中加入17β-雌二醇17β-E2₪↟╃•,再與HRP標記的17β-雌二醇17β-E2抗體結合₪↟╃•,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物₪↟╃•,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色▩✘│☁◕。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色₪↟╃•,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色▩✘│☁◕。顏色的深淺和樣品中的17β-雌二醇17β-E2呈正相關▩✘│☁◕。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)₪↟╃•,透過標準曲線計算樣品中大鼠17β-雌二醇17β-E2的含量▩✘│☁◕。

 

試劑盒組成│₪✘:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品│₪✘:72ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃儲存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

樣本處理及要求│₪✘:

1. 血清│₪✘:室溫血液自然凝固10-20分鐘₪↟╃•,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清₪↟╃•,儲存過程中如出現沉澱₪↟╃•,應再次離心▩✘│☁◕。

2. 血漿│₪✘:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑₪↟╃•,混合10-20分鐘後₪↟╃•,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清₪↟╃•,儲存過程中如有沉澱形成₪↟╃•,應該再次離心▩✘│☁◕。

3. 尿液│₪✘:用無菌管收集₪↟╃•,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清₪↟╃•,儲存過程中如有沉澱形成₪↟╃•,應再次離心▩✘│☁◕。胸腹水₪₪││✘、腦脊液參照實行▩✘│☁◕。

4. 細胞培養上清│₪✘:檢測分泌性的成份時₪↟╃•,用無菌管收集▩✘│☁◕。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清▩✘│☁◕。檢測細胞內的成份時₪↟╃•,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液₪↟╃•,細胞濃度達到100/ml左右▩✘│☁◕。透過反覆凍融₪↟╃•,以使細胞破壞並放出細胞內成份▩✘│☁◕。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清▩✘│☁◕。儲存過程中如有沉澱形成₪↟╃•,應再次離心▩✘│☁◕。

5. 組織標本│₪✘:切割標本後₪↟╃•,稱取重量▩✘│☁◕。加入一定量的PBS₪↟╃•,PH7.4▩✘│☁◕。用液氮迅速冷凍儲存備用▩✘│☁◕。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度▩✘│☁◕。加入一定量的PBSPH7.4)₪↟╃•,用手工或勻漿器將標本勻漿充分▩✘│☁◕。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩✘│☁◕。仔細收集上清▩✘│☁◕。分裝後一份待檢測₪↟╃•,其餘冷凍備用▩✘│☁◕。

6. 標本採集後儘早進行提取₪↟╃•,提取按相關文獻進行₪↟╃•,提取後應儘快進行實驗▩✘│☁◕。若不能馬上進行試驗₪↟╃•,可將標本放於-20℃儲存₪↟╃•,但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品₪↟╃•,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性▩✘│☁◕。

 

操作步驟│₪✘:

1.         標準品的稀釋與加樣│₪✘:在酶標包被板上設標準品孔10孔₪↟╃•,在*₪₪││✘、第二孔中分別加標準品100μl₪↟╃•,然後在*₪₪││✘、第二孔中加標準品稀釋液50μl₪↟╃•,混勻;然後從*孔₪₪││✘、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔₪↟╃•,再在第三₪₪││✘、第四孔分別加標準品稀釋液50μl₪↟╃•,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉₪↟╃•,再各取50μl分別加到第五₪₪││✘、第六孔中₪↟╃•,再在第五₪₪││✘、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul₪↟╃•,混勻;混勻後從第五₪₪││✘、第六孔中各取50μl分別加到第七₪₪││✘、第八孔中₪↟╃•,再在第七₪₪││✘、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl₪↟╃•,混勻後從第七₪₪││✘、第八孔中分別取50μl加到第九₪₪││✘、第十孔中₪↟╃•,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl₪↟╃•,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉▩✘│☁◕。(稀釋後各孔加樣量都為50μl₪↟╃•,濃度分別為48ng/L₪↟╃•,32ng/L ₪↟╃•,16ng/L₪↟╃•,8ng/L₪↟╃•, 4ng/L)▩✘│☁◕。

2.         加樣│₪✘:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑₪↟╃•,其餘各步操作相同)₪₪││✘、待測樣品孔▩✘│☁◕。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl₪↟╃•,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)▩✘│☁◕。加樣將樣品加於酶標板孔底部₪↟╃•,儘量不觸及孔壁₪↟╃•,輕輕晃動混勻▩✘│☁◕。

3.         溫育│₪✘:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘▩✘│☁◕。

4.         配液│₪✘:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋後備用▩✘│☁◕。

5.         洗滌│₪✘:小心揭掉封板膜₪↟╃•,棄去液體₪↟╃•,甩幹₪↟╃•,每孔加滿洗滌液₪↟╃•,靜置30秒後棄去₪↟╃•,如此重複5次₪↟╃•,拍幹▩✘│☁◕。

6.         加酶│₪✘:每孔加入酶標試劑50μl₪↟╃•,空白孔除外▩✘│☁◕。

7.         溫育│₪✘:操作同3▩✘│☁◕。

8.         洗滌│₪✘:操作同5▩✘│☁◕。

9.         顯色│₪✘:每孔先加入顯色劑A50μl₪↟╃•,再加入顯色劑B50μl₪↟╃•,輕輕震盪混勻₪↟╃•,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止│₪✘:每孔加終止液50μl₪↟╃•,終止反應(此時藍色立轉黃色)▩✘│☁◕。

11.     測定│₪✘:以空白孔調零₪↟╃•,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)▩✘│☁◕。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行▩✘│☁◕。

 

注意事項│₪✘:

1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用₪↟╃•,酶標包被板開封后如未用完₪↟╃•,板條應裝入密封袋中儲存▩✘│☁◕。

2.  濃洗滌液可能會有結晶析出₪↟╃•,稀釋時可在水浴中加溫助溶₪↟╃•,洗滌時不影響結果▩✘│☁◕。

3.  各步加樣均應使用加樣器₪↟╃•,並經常校對其準確性₪↟╃•,以避免試驗誤差▩✘│☁◕。一次加樣時間控制在5分鐘內₪↟╃•,如標本數量多₪↟╃•,推薦使用排槍加樣▩✘│☁◕。

4.  請每次測定的同時做標準曲線₪↟╃•,做復孔▩✘│☁◕。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)₪↟╃•,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定₪↟╃•,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)▩✘│☁◕。

5.  封板膜只限一次性使用₪↟╃•,以避免交叉汙染▩✘│☁◕。

6.  底物請避光儲存▩✘│☁◕。

7.  嚴格按照說明書的操作進行₪↟╃•,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.  所有樣品₪↟╃•,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理▩✘│☁◕。

9.  本試劑不同批號組分不得混用▩✘│☁◕。

10. 如與英文說明書有異₪↟╃•,以英文說明書為準▩✘│☁◕。

 

文字框:  計算│₪✘:

以標準物的濃度為橫座標₪↟╃•,OD值為縱座標₪↟╃•,   

在座標紙上繪出標準曲線₪↟╃•,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋     

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線迴歸方程式₪↟╃•,將樣品的OD     

代入方程式₪↟╃•,計算出樣品濃度₪↟╃•,再乘以稀釋     

倍數₪↟╃•,即為樣品的實際濃度▩✘│☁◕。                 

 

                                              

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒效能│₪✘:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上▩✘│☁◕。

2.批內與批間應分別小於9%15%

儲存條件及有效期│₪✘:

1.試劑盒儲存│₪✘:2-8▩✘│☁◕。

2.有效期│₪✘:6個月



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