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大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒說明書

大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒說明書

產品型號₪₪☁◕:

所屬分類₪₪☁◕:大鼠ELISA

產品時間₪₪☁◕:2022-05-18

簡要描述₪₪☁◕:大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒--打折銷售中☁·╃│·,請·✘·!

詳細說明₪₪☁◕:

 

大鼠睪酮(TELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的₪₪☁◕:本試劑盒用於測定大鼠血清☁·╃│·,血漿及相關液體樣本中睪酮(T)的含量╃•╃☁│。

實驗原理₪₪☁◕:

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠睪酮(T水平╃•╃☁│。用純化的大鼠睪酮(T抗體包被微孔板☁·╃│·,製成固相抗體☁·╃│·,往包被單抗的微孔中依次加入睪酮(T)☁·╃│·,再與HRP標記的睪酮(T抗體結合☁·╃│·,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物☁·╃│·,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色╃•╃☁│。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色☁·╃│·,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色╃•╃☁│。顏色的深淺和樣品中的睪酮(T呈正相關╃•╃☁│。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)☁·╃│·,透過標準曲線計算樣品中大鼠睪酮(T濃度╃•╃☁│。

 

試劑盒組成₪₪☁◕:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品₪₪☁◕:4.5ng/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃儲存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

樣本處理及要求₪₪☁◕:

1. 血清₪₪☁◕:室溫血液自然凝固10-20分鐘☁·╃│·,離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清☁·╃│·,儲存過程中如出現沉澱☁·╃│·,應再次離心╃•╃☁│。

2. 血漿₪₪☁◕:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑☁·╃│·,混合10-20分鐘後☁·╃│·,離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清☁·╃│·,儲存過程中如有沉澱形成☁·╃│·,應該再次離心╃•╃☁│。

3. 尿液₪₪☁◕:用無菌管收集☁·╃│·,離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清☁·╃│·,儲存過程中如有沉澱形成☁·╃│·,應再次離心╃•╃☁│。胸腹水▩₪、腦脊液參照實行╃•╃☁│。

4. 細胞培養上清₪₪☁◕:檢測分泌性的成份時☁·╃│·,用無菌管收集╃•╃☁│。離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清╃•╃☁│。檢測細胞內的成份時☁·╃│·,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液☁·╃│·,細胞濃度達到100/ml左右╃•╃☁│。透過反覆凍融☁·╃│·,以使細胞破壞並放出細胞內成份╃•╃☁│。離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清╃•╃☁│。儲存過程中如有沉澱形成☁·╃│·,應再次離心╃•╃☁│。

5. 組織標本₪₪☁◕:切割標本後☁·╃│·,稱取重量╃•╃☁│。加入一定量的PBS☁·╃│·,PH7.4╃•╃☁│。用液氮迅速冷凍儲存備用╃•╃☁│。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度╃•╃☁│。加入一定量的PBSPH7.4)☁·╃│·,用手工或勻漿器將標本勻漿充分╃•╃☁│。離心20分鐘左右(2000-3000/分)╃•╃☁│。仔細收集上清╃•╃☁│。分裝後一份待檢測☁·╃│·,其餘冷凍備用╃•╃☁│。

6. 標本採集後儘早進行提取☁·╃│·,提取按相關文獻進行☁·╃│·,提取後應儘快進行實驗╃•╃☁│。若不能馬上進行試驗☁·╃│·,可將標本放於-20℃儲存☁·╃│·,但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品☁·╃│·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃•╃☁│。

 

操作步驟₪₪☁◕:

1.         標準品的稀釋與加樣₪₪☁◕:在酶標包被板上設標準品孔10孔☁·╃│·,在*▩₪、第二孔中分別加標準品100μl☁·╃│·,然後在*▩₪、第二孔中加標準品稀釋液50μl☁·╃│·,混勻;然後從*孔▩₪、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔☁·╃│·,再在第三▩₪、第四孔分別加標準品稀釋液50μl☁·╃│·,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉☁·╃│·,再各取50μl分別加到第五▩₪、第六孔中☁·╃│·,再在第五▩₪、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul☁·╃│·,混勻;混勻後從第五▩₪、第六孔中各取50μl分別加到第七▩₪、第八孔中☁·╃│·,再在第七▩₪、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl☁·╃│·,混勻後從第七▩₪、第八孔中分別取50μl加到第九▩₪、第十孔中☁·╃│·,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl☁·╃│·,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉╃•╃☁│。(稀釋後各孔加樣量都為50μl☁·╃│·,濃度分別為3 ng/ml☁·╃│·,2 ng/ml ☁·╃│·,1ng/ml☁·╃│·,0.5ng/ml☁·╃│·, 0.25 ng/ml)╃•╃☁│。

2.         加樣₪₪☁◕:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑☁·╃│·,其餘各步操作相同)▩₪、待測樣品孔╃•╃☁│。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl☁·╃│·,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)╃•╃☁│。加樣將樣品加於酶標板孔底部☁·╃│·,儘量不觸及孔壁☁·╃│·,輕輕晃動混勻╃•╃☁│。

3.         溫育₪₪☁◕:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘╃•╃☁│。

4.         配液₪₪☁◕:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋後備用╃•╃☁│。

5.         洗滌₪₪☁◕:小心揭掉封板膜☁·╃│·,棄去液體☁·╃│·,甩幹☁·╃│·,每孔加滿洗滌液☁·╃│·,靜置30秒後棄去☁·╃│·,如此重複5次☁·╃│·,拍幹╃•╃☁│。

6.         加酶₪₪☁◕:每孔加入酶標試劑50μl☁·╃│·,空白孔除外╃•╃☁│。

7.         溫育₪₪☁◕:操作同3╃•╃☁│。

8.         洗滌₪₪☁◕:操作同5╃•╃☁│。

9.         顯色₪₪☁◕:每孔先加入顯色劑A50μl☁·╃│·,再加入顯色劑B50μl☁·╃│·,輕輕震盪混勻☁·╃│·,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止₪₪☁◕:每孔加終止液50μl☁·╃│·,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃•╃☁│。

11.     測定₪₪☁◕:以空白空調零☁·╃│·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃•╃☁│。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行╃•╃☁│。

 

注意事項₪₪☁◕:

1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用☁·╃│·,酶標包被板開封后如未用完☁·╃│·,板條應裝入密封袋中儲存╃•╃☁│。

2.  濃洗滌液可能會有結晶析出☁·╃│·,稀釋時可在水浴中加溫助溶☁·╃│·,洗滌時不影響結果╃•╃☁│。

3.  各步加樣均應使用加樣器☁·╃│·,並經常校對其準確性☁·╃│·,以避免試驗誤差╃•╃☁│。一次加樣時間控制在5分鐘內☁·╃│·,如標本數量多☁·╃│·,推薦使用排槍加樣╃•╃☁│。

4.  請每次測定的同時做標準曲線☁·╃│·,做復孔╃•╃☁│。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)☁·╃│·,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定☁·╃│·,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)╃•╃☁│。

5.  封板膜只限一次性使用☁·╃│·,以避免交叉汙染╃•╃☁│。

6.  底物請避光儲存╃•╃☁│。

7.  嚴格按照說明書的操作進行☁·╃│·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.  所有樣品☁·╃│·,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理╃•╃☁│。

9.  本試劑不同批號組分不得混用╃•╃☁│。

10. 如與英文說明書有異☁·╃│·,以英文說明書為準╃•╃☁│。

 

文字框:  計算₪₪☁◕:

以標準物的濃度為橫座標☁·╃│·,OD值為縱座標☁·╃│·,   

在座標紙上繪出標準曲線☁·╃│·,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線迴歸方程式☁·╃│·,將樣品的OD      

代入方程式☁·╃│·,計算出樣品濃度☁·╃│·,再乘以稀釋      

倍數☁·╃│·,即為樣品的實際濃度╃•╃☁│。                  

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒效能₪₪☁◕:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃•╃☁│。

2.批內與批見應分別小於9%15%

儲存條件及有效期₪₪☁◕:

1.試劑盒儲存₪₪☁◕:2-8╃•╃☁│。

2.有效期₪₪☁◕:6個月

 

 

 



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