大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒說明書

產品型號☁☁•◕：

所屬分類☁☁•◕：大鼠ELISA

產品時間☁☁•◕：2022-05-18

簡要描述☁☁•◕：大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒--打折銷售中│₪，請╃•！

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大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的☁☁•◕：本試劑盒用於測定大鼠血清│₪，血漿及相關液體樣本中睪酮（T）的含量▩▩◕◕。

實驗原理☁☁•◕：

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠睪酮（T）水平▩▩◕◕。用純化的大鼠睪酮（T）抗體包被微孔板│₪，製成固相抗體│₪，往包被單抗的微孔中依次加入睪酮（T）│₪，再與HRP標記的睪酮（T）抗體結合│₪，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物│₪，經過*洗滌後加底物TMB顯色▩▩◕◕。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色│₪，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色▩▩◕◕。顏色的深淺和樣品中的睪酮（T）呈正相關▩▩◕◕。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）│₪，透過標準曲線計算樣品中大鼠睪酮（T）濃度▩▩◕◕。

試劑盒組成☁☁•◕：

樣本處理及要求☁☁•◕：

1. 血清☁☁•◕：室溫血液自然凝固10-20分鐘│₪，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清│₪，儲存過程中如出現沉澱│₪，應再次離心▩▩◕◕。

2. 血漿☁☁•◕：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑│₪，混合10-20分鐘後│₪，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清│₪，儲存過程中如有沉澱形成│₪，應該再次離心▩▩◕◕。

3. 尿液☁☁•◕：用無菌管收集│₪，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清│₪，儲存過程中如有沉澱形成│₪，應再次離心▩▩◕◕。胸腹水₪◕✘╃✘、腦脊液參照實行▩▩◕◕。

4. 細胞培養上清☁☁•◕：檢測分泌性的成份時│₪，用無菌管收集▩▩◕◕。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清▩▩◕◕。檢測細胞內的成份時│₪，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液│₪，細胞濃度達到100萬/ml左右▩▩◕◕。透過反覆凍融│₪，以使細胞破壞並放出細胞內成份▩▩◕◕。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清▩▩◕◕。儲存過程中如有沉澱形成│₪，應再次離心▩▩◕◕。

5. 組織標本☁☁•◕：切割標本後│₪，稱取重量▩▩◕◕。加入一定量的PBS│₪，PH7.4▩▩◕◕。用液氮迅速冷凍儲存備用▩▩◕◕。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度▩▩◕◕。加入一定量的PBS（PH7.4）│₪，用手工或勻漿器將標本勻漿充分▩▩◕◕。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）▩▩◕◕。仔細收集上清▩▩◕◕。分裝後一份待檢測│₪，其餘冷凍備用▩▩◕◕。

6. 標本採集後儘早進行提取│₪，提取按相關文獻進行│₪，提取後應儘快進行實驗▩▩◕◕。若不能馬上進行試驗│₪，可將標本放於-20℃儲存│₪，但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品│₪，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性▩▩◕◕。

操作步驟☁☁•◕：

1.         標準品的稀釋與加樣☁☁•◕：在酶標包被板上設標準品孔10孔│₪，在*₪◕✘╃✘、第二孔中分別加標準品100μl│₪，然後在*₪◕✘╃✘、第二孔中加標準品稀釋液50μl│₪，混勻；然後從*孔₪◕✘╃✘、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔│₪，再在第三₪◕✘╃✘、第四孔分別加標準品稀釋液50μl│₪，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉│₪，再各取50μl分別加到第五₪◕✘╃✘、第六孔中│₪，再在第五₪◕✘╃✘、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul│₪，混勻；混勻後從第五₪◕✘╃✘、第六孔中各取50μl分別加到第七₪◕✘╃✘、第八孔中│₪，再在第七₪◕✘╃✘、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl│₪，混勻後從第七₪◕✘╃✘、第八孔中分別取50μl加到第九₪◕✘╃✘、第十孔中│₪，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl│₪，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉▩▩◕◕。（稀釋後各孔加樣量都為50μl│₪，濃度分別為3 ng/ml│₪，2 ng/ml │₪，1ng/ml│₪，0.5ng/ml│₪， 0.25 ng/ml）▩▩◕◕。

2.         加樣☁☁•◕：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑│₪，其餘各步操作相同）₪◕✘╃✘、待測樣品孔▩▩◕◕。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl│₪，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）▩▩◕◕。加樣將樣品加於酶標板孔底部│₪，儘量不觸及孔壁│₪，輕輕晃動混勻▩▩◕◕。

3.         溫育☁☁•◕：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘▩▩◕◕。

4.         配液☁☁•◕：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用▩▩◕◕。

5.         洗滌☁☁•◕：小心揭掉封板膜│₪，棄去液體│₪，甩幹│₪，每孔加滿洗滌液│₪，靜置30秒後棄去│₪，如此重複5次│₪，拍幹▩▩◕◕。

6.         加酶☁☁•◕：每孔加入酶標試劑50μl│₪，空白孔除外▩▩◕◕。

7.         溫育☁☁•◕：操作同3▩▩◕◕。

8.         洗滌☁☁•◕：操作同5▩▩◕◕。

9.         顯色☁☁•◕：每孔先加入顯色劑A50μl│₪，再加入顯色劑B50μl│₪，輕輕震盪混勻│₪，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止☁☁•◕：每孔加終止液50μl│₪，終止反應（此時藍色立轉黃色）▩▩◕◕。

11.     測定☁☁•◕：以空白空調零│₪，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）▩▩◕◕。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行▩▩◕◕。

注意事項☁☁•◕：

1．  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用│₪，酶標包被板開封后如未用完│₪，板條應裝入密封袋中儲存▩▩◕◕。

2．  濃洗滌液可能會有結晶析出│₪，稀釋時可在水浴中加溫助溶│₪，洗滌時不影響結果▩▩◕◕。

3．  各步加樣均應使用加樣器│₪，並經常校對其準確性│₪，以避免試驗誤差▩▩◕◕。一次加樣時間控制在5分鐘內│₪，如標本數量多│₪，推薦使用排槍加樣▩▩◕◕。

4．  請每次測定的同時做標準曲線│₪，做復孔▩▩◕◕。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值）│₪，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定│₪，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）▩▩◕◕。

5．  封板膜只限一次性使用│₪，以避免交叉汙染▩▩◕◕。

6．  底物請避光儲存▩▩◕◕。

7．  嚴格按照說明書的操作進行│₪，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．  所有樣品│₪，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理▩▩◕◕。

9．  本試劑不同批號組分不得混用▩▩◕◕。

10. 如與英文說明書有異│₪，以英文說明書為準▩▩◕◕。

計算☁☁•◕：

以標準物的濃度為橫座標│₪，OD值為縱座標│₪，   

在座標紙上繪出標準曲線│₪，根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋      

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線迴歸方程式│₪，將樣品的OD值      

代入方程式│₪，計算出樣品濃度│₪，再乘以稀釋      

倍數│₪，即為樣品的實際濃度▩▩◕◕。                  

（此圖僅供參考）

試劑盒效能☁☁•◕：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上▩▩◕◕。

2.批內與批見應分別小於9%和15%

儲存條件及有效期☁☁•◕：

1.試劑盒儲存☁☁•◕：；2-8℃▩▩◕◕。

2．有效期☁☁•◕：6個月