人白介素17（IL-17）ELISA試劑盒說明書

產品型號↟╃·✘◕：

所屬分類↟╃·✘◕：人的ELISA

產品時間↟╃·✘◕：2022-05-18

簡要描述↟╃·✘◕：人白介素17（IL-17）ELISA試劑盒--打折銷售中╃•▩·，請✘╃│！

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人白介素17（IL-17）ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的↟╃·✘◕：本試劑盒用於測定人血清╃•▩·，血漿及相關液體樣本中白細胞介素17（IL-17）的含量•│↟╃•。

實驗原理↟╃·✘◕：

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-17（IL-17）水平•│↟╃•。用純化的人白細胞介素-17（IL-17）抗體包被微孔板╃•▩·，製成固相抗體╃•▩·，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-17╃•▩·，再與HRP標記的羊抗人抗體結合╃•▩·，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物╃•▩·，經過*洗滌後加底物TMB顯色•│↟╃•。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色╃•▩·，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色•│↟╃•。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-17（IL-17）呈正相關•│↟╃•。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）╃•▩·，透過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-17（IL-17）濃度•│↟╃•。

試劑盒組成↟╃·✘◕：

樣本處理及要求↟╃·✘◕：

1. 血清↟╃·✘◕：室溫血液自然凝固10-20分鐘╃•▩·，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清╃•▩·，儲存過程中如出現沉澱╃•▩·，應再次離心•│↟╃•。

2. 血漿↟╃·✘◕：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑╃•▩·，混合10-20分鐘後╃•▩·，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清╃•▩·，儲存過程中如有沉澱形成╃•▩·，應該再次離心•│↟╃•。

3. 尿液↟╃·✘◕：用無菌管收集╃•▩·，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清╃•▩·，儲存過程中如有沉澱形成╃•▩·，應再次離心•│↟╃•。胸腹水•↟、腦脊液參照實行•│↟╃•。

4. 細胞培養上清↟╃·✘◕：檢測分泌性的成份時╃•▩·，用無菌管收集•│↟╃•。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清•│↟╃•。檢測細胞內的成份時╃•▩·，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液╃•▩·，細胞濃度達到100萬/ml左右•│↟╃•。透過反覆凍融╃•▩·，以使細胞破壞並放出細胞內成份•│↟╃•。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清•│↟╃•。儲存過程中如有沉澱形成╃•▩·，應再次離心•│↟╃•。

5. 組織標本↟╃·✘◕：切割標本後╃•▩·，稱取重量•│↟╃•。加入一定量的PBS╃•▩·，PH7.4•│↟╃•。用液氮迅速冷凍儲存備用•│↟╃•。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度•│↟╃•。加入一定量的PBS（PH7.4）╃•▩·，用手工或勻漿器將標本勻漿充分•│↟╃•。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）•│↟╃•。仔細收集上清•│↟╃•。分裝後一份待檢測╃•▩·，其餘冷凍備用•│↟╃•。

6. 標本採集後儘早進行提取╃•▩·，提取按相關文獻進行╃•▩·，提取後應儘快進行實驗•│↟╃•。若不能馬上進行試驗╃•▩·，可將標本放於-20℃儲存╃•▩·，但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品╃•▩·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性•│↟╃•。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣↟╃·✘◕：在酶標包被板上設標準品孔10孔╃•▩·，在*•↟、第二孔中分別加標準品100μl╃•▩·，然後在*•↟、第二孔中加標準品稀釋液50μl╃•▩·，混勻；然後從*孔•↟、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔╃•▩·，再在第三•↟、第四孔分別加標準品稀釋液50μl╃•▩·，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉╃•▩·，再各取50μl分別加到第五•↟、第六孔中╃•▩·，再在第五•↟、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul╃•▩·，混勻；混勻後從第五•↟、第六孔中各取50μl分別加到第七•↟、第八孔中╃•▩·，再在第七•↟、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl╃•▩·，混勻後從第七•↟、第八孔中分別取50μl加到第九•↟、第十孔中╃•▩·，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl╃•▩·，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉•│↟╃•。（稀釋後各孔加樣量都為50μl╃•▩·，濃度分別為360pg/ml╃•▩·，240 pg/ml╃•▩·，120 pg/ml╃•▩·，60pg/ml╃•▩·，30 pg/ml）•│↟╃•。

2.         加樣↟╃·✘◕：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑╃•▩·，其餘各步操作相同）•↟、待測樣品孔•│↟╃•。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl╃•▩·，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）•│↟╃•。加樣將樣品加於酶標板孔底部╃•▩·，儘量不觸及孔壁╃•▩·，輕輕晃動混勻•│↟╃•。

3.         溫育↟╃·✘◕：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘•│↟╃•。

4.         配液↟╃·✘◕：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用•│↟╃•。

5.         洗滌↟╃·✘◕：小心揭掉封板膜╃•▩·，棄去液體╃•▩·，甩幹╃•▩·，每孔加滿洗滌液╃•▩·，靜置30秒後棄去╃•▩·，如此重複5次╃•▩·，拍幹•│↟╃•。

6.         加酶↟╃·✘◕：每孔加入酶標試劑50μl╃•▩·，空白孔除外•│↟╃•。

7.         溫育↟╃·✘◕：操作同3•│↟╃•。

8.         洗滌↟╃·✘◕：操作同5•│↟╃•。

10.     終止↟╃·✘◕：每孔加終止液50μl╃•▩·，終止反應（此時藍色立轉黃色）•│↟╃•。

11.     測定↟╃·✘◕：以空白空調零╃•▩·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）•│↟╃•。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行•│↟╃•。

注意事項↟╃·✘◕：

1．  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用╃•▩·，酶標包被板開封后如未用完╃•▩·，板條應裝入密封袋中儲存•│↟╃•。

2．  濃洗滌液可能會有結晶析出╃•▩·，稀釋時可在水浴中加溫助溶╃•▩·，洗滌時不影響結果•│↟╃•。

3．  各步加樣均應使用加樣器╃•▩·，並經常校對其準確性╃•▩·，以避免試驗誤差•│↟╃•。一次加樣時間控制在5分鐘內╃•▩·，如標本數量多╃•▩·，推薦使用排槍加樣•│↟╃•。

4．  請每次測定的同時做標準曲線╃•▩·，做復孔•│↟╃•。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值）╃•▩·，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定╃•▩·，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）•│↟╃•。

5．  封板膜只限一次性使用╃•▩·，以避免交叉汙染•│↟╃•。

6．  底物請避光儲存•│↟╃•。

7．  嚴格按照說明書的操作進行╃•▩·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．  所有樣品╃•▩·，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理•│↟╃•。

9．  本試劑不同批號組分不得混用•│↟╃•。

10. 如與英文說明書有異╃•▩·，以英文說明書為準•│↟╃•。

計算↟╃·✘◕：

以標準物的濃度為橫座標╃•▩·，OD值為縱座標╃•▩·，   

在座標紙上繪出標準曲線╃•▩·，根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋     

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線迴歸方程式╃•▩·，將樣品的OD值     

代入方程式╃•▩·，計算出樣品濃度╃•▩·，再乘以稀釋     

倍數╃•▩·，即為樣品的實際濃度•│↟╃•。                 

（此圖僅供參考）

試劑盒效能↟╃·✘◕：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上•│↟╃•。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

儲存條件及有效期↟╃·✘◕：

1.試劑盒儲存↟╃·✘◕：；2-8℃•│↟╃•。

2．有效期↟╃·✘◕：6個月

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