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人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒說明書

人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒說明書

產品型號▩·₪•◕:

所屬分類▩·₪•◕:人的ELISA

產品時間▩·₪•◕:2022-05-18

簡要描述▩·₪•◕:人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒--打折銷售中✘•✘,請↟◕╃!

詳細說明▩·₪•◕:

人白介素17IL-17ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的▩·₪•◕:本試劑盒用於測定人血清✘•✘,血漿及相關液體樣本中白細胞介素17IL-17)的含量•·◕✘•。

實驗原理▩·₪•◕:

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-17IL-17水平•·◕✘•。用純化的人白細胞介素-17IL-17)抗體包被微孔板✘•✘,製成固相抗體✘•✘,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-17✘•✘,再與HRP標記的羊抗人抗體結合✘•✘,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物✘•✘,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色•·◕✘•。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色✘•✘,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色•·◕✘•。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-17IL-17呈正相關•·◕✘•。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)✘•✘,透過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-17IL-17濃度•·◕✘•。

試劑盒組成▩·₪•◕:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品▩·₪•◕:540pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃儲存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

樣本處理及要求▩·₪•◕:

1. 血清▩·₪•◕:室溫血液自然凝固10-20分鐘✘•✘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清✘•✘,儲存過程中如出現沉澱✘•✘,應再次離心•·◕✘•。

2. 血漿▩·₪•◕:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑✘•✘,混合10-20分鐘後✘•✘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清✘•✘,儲存過程中如有沉澱形成✘•✘,應該再次離心•·◕✘•。

3. 尿液▩·₪•◕:用無菌管收集✘•✘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清✘•✘,儲存過程中如有沉澱形成✘•✘,應再次離心•·◕✘•。胸腹水✘✘│、腦脊液參照實行•·◕✘•。

4. 細胞培養上清▩·₪•◕:檢測分泌性的成份時✘•✘,用無菌管收集•·◕✘•。離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清•·◕✘•。檢測細胞內的成份時✘•✘,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液✘•✘,細胞濃度達到100/ml左右•·◕✘•。透過反覆凍融✘•✘,以使細胞破壞並放出細胞內成份•·◕✘•。離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清•·◕✘•。儲存過程中如有沉澱形成✘•✘,應再次離心•·◕✘•。

5. 組織標本▩·₪•◕:切割標本後✘•✘,稱取重量•·◕✘•。加入一定量的PBS✘•✘,PH7.4•·◕✘•。用液氮迅速冷凍儲存備用•·◕✘•。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度•·◕✘•。加入一定量的PBSPH7.4)✘•✘,用手工或勻漿器將標本勻漿充分•·◕✘•。離心20分鐘左右(2000-3000/分)•·◕✘•。仔細收集上清•·◕✘•。分裝後一份待檢測✘•✘,其餘冷凍備用•·◕✘•。

6. 標本採集後儘早進行提取✘•✘,提取按相關文獻進行✘•✘,提取後應儘快進行實驗•·◕✘•。若不能馬上進行試驗✘•✘,可將標本放於-20℃儲存✘•✘,但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品✘•✘,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性•·◕✘•。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣▩·₪•◕:在酶標包被板上設標準品孔10孔✘•✘,在*✘✘│、第二孔中分別加標準品100μl✘•✘,然後在*✘✘│、第二孔中加標準品稀釋液50μl✘•✘,混勻;然後從*孔✘✘│、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔✘•✘,再在第三✘✘│、第四孔分別加標準品稀釋液50μl✘•✘,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉✘•✘,再各取50μl分別加到第五✘✘│、第六孔中✘•✘,再在第五✘✘│、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul✘•✘,混勻;混勻後從第五✘✘│、第六孔中各取50μl分別加到第七✘✘│、第八孔中✘•✘,再在第七✘✘│、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl✘•✘,混勻後從第七✘✘│、第八孔中分別取50μl加到第九✘✘│、第十孔中✘•✘,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl✘•✘,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉•·◕✘•。(稀釋後各孔加樣量都為50μl✘•✘,濃度分別為360pg/ml✘•✘,240 pg/ml✘•✘,120 pg/ml✘•✘,60pg/ml✘•✘,30 pg/ml)•·◕✘•。

2.         加樣▩·₪•◕:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑✘•✘,其餘各步操作相同)✘✘│、待測樣品孔•·◕✘•。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl✘•✘,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)•·◕✘•。加樣將樣品加於酶標板孔底部✘•✘,儘量不觸及孔壁✘•✘,輕輕晃動混勻•·◕✘•。

3.         溫育▩·₪•◕:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘•·◕✘•。

4.         配液▩·₪•◕:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋後備用•·◕✘•。

5.         洗滌▩·₪•◕:小心揭掉封板膜✘•✘,棄去液體✘•✘,甩幹✘•✘,每孔加滿洗滌液✘•✘,靜置30秒後棄去✘•✘,如此重複5次✘•✘,拍幹•·◕✘•。

6.         加酶▩·₪•◕:每孔加入酶標試劑50μl✘•✘,空白孔除外•·◕✘•。

7.         溫育▩·₪•◕:操作同3•·◕✘•。

8.         洗滌▩·₪•◕:操作同5•·◕✘•。

 

9.         顯色▩·₪•◕:每孔先加入顯色劑A50μl✘•✘,再加入顯色劑B50μl✘•✘,輕輕震盪混勻✘•✘,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止▩·₪•◕:每孔加終止液50μl✘•✘,終止反應(此時藍色立轉黃色)•·◕✘•。

11.     測定▩·₪•◕:以空白空調零✘•✘,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)•·◕✘•。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行•·◕✘•。

注意事項▩·₪•◕:

1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用✘•✘,酶標包被板開封后如未用完✘•✘,板條應裝入密封袋中儲存•·◕✘•。

2.  濃洗滌液可能會有結晶析出✘•✘,稀釋時可在水浴中加溫助溶✘•✘,洗滌時不影響結果•·◕✘•。

3.  各步加樣均應使用加樣器✘•✘,並經常校對其準確性✘•✘,以避免試驗誤差•·◕✘•。一次加樣時間控制在5分鐘內✘•✘,如標本數量多✘•✘,推薦使用排槍加樣•·◕✘•。

4.  請每次測定的同時做標準曲線✘•✘,做復孔•·◕✘•。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)✘•✘,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定✘•✘,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)•·◕✘•。

5.  封板膜只限一次性使用✘•✘,以避免交叉汙染•·◕✘•。

6.  底物請避光儲存•·◕✘•。

7.  嚴格按照說明書的操作進行✘•✘,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.  所有樣品✘•✘,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理•·◕✘•。

9.  本試劑不同批號組分不得混用•·◕✘•。

10. 如與英文說明書有異✘•✘,以英文說明書為準•·◕✘•。

文字框:  計算▩·₪•◕:

以標準物的濃度為橫座標✘•✘,OD值為縱座標✘•✘,   

在座標紙上繪出標準曲線✘•✘,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋     

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線迴歸方程式✘•✘,將樣品的OD     

代入方程式✘•✘,計算出樣品濃度✘•✘,再乘以稀釋     

倍數✘•✘,即為樣品的實際濃度•·◕✘•。                 

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

 

 

 

試劑盒效能▩·₪•◕:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上•·◕✘•。

2.批內與批間應分別小於9%15%

儲存條件及有效期▩·₪•◕:

1.試劑盒儲存▩·₪•◕:2-8•·◕✘•。

2.有效期▩·₪•◕:6個月

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